環(huán)境設(shè)置:實(shí)驗(yàn)的首要條件是營(yíng)造一個(gè)穩(wěn)定且適宜的動(dòng)物生活環(huán)境。SPF級(jí)(無(wú)特定病原體)動(dòng)物房是Zui佳選擇,室溫需嚴(yán)格控制在22±2℃,濕度保持在40±20%,模擬小鼠的棲息環(huán)境。此外12小時(shí)的晝夜交替周期有助于維持小鼠的正常生理節(jié)律。實(shí)驗(yàn)室應(yīng)保持安靜,遠(yuǎn)離噪音源,以減少外界因素對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響。
設(shè)備與材料準(zhǔn)備:
實(shí)驗(yàn)箱的設(shè)計(jì),采用55cm高、60cm寬、11.5cm深的塑料箱,內(nèi)部設(shè)置擋板以分隔個(gè)體,減少相互干擾。
核心設(shè)備包括懸尾裝置,由懸掛桿和固定膠帶組成,用于懸掛小鼠;
醫(yī)用膠帶需選擇對(duì)皮膚溫和、不易引起過(guò)敏的類(lèi)型;
高清攝像設(shè)備確保全程記錄小鼠行為細(xì)節(jié);
分析軟件如VisuTrack,能夠自動(dòng)追蹤并分析視頻數(shù)據(jù),提高實(shí)驗(yàn)效率和準(zhǔn)確性;
準(zhǔn)備充足的清潔用品,確保實(shí)驗(yàn)后設(shè)備的徹底消殺。
動(dòng)物準(zhǔn)備:實(shí)驗(yàn)對(duì)象選用SPF級(jí)小鼠,健康無(wú)病疾,且已適應(yīng)實(shí)驗(yàn)環(huán)境至少24小時(shí),理想適應(yīng)期為三天。在此期間,小鼠應(yīng)自由攝食飲水,保持正常的晝夜活動(dòng)模式,以減少因環(huán)境適應(yīng)不適引起的行為偏差。
動(dòng)物處理:實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí),以溫和的方式從籠中取出小鼠,避免任何可能增加其壓力的操作。使用醫(yī)用膠帶在距離尾巴尖約1cm處輕輕固定,確保既不影響小鼠呼吸,也不造成疼痛。
實(shí)驗(yàn)設(shè)置:將小鼠尾巴懸掛在裝置上,調(diào)整至鼻尖距離地面約30cm的高度,旨在模擬一種無(wú)法逃脫的困境。攝像設(shè)備需預(yù)先調(diào)整,確保小鼠全身清晰可見(jiàn),背景顏色與小鼠形成鮮明對(duì)比,便于后續(xù)分析。
行為記錄:錄像開(kāi)始,持續(xù)6分鐘,但重點(diǎn)分析后4分鐘的不動(dòng)時(shí)間,因?yàn)檫@段時(shí)間Zui能反映小鼠的絕望情緒。記錄小鼠的掙扎行為,包括嘗試逃脫、四肢擺動(dòng)等,以及Zui終進(jìn)入的不動(dòng)狀態(tài),這些都是評(píng)估抑郁樣行為的關(guān)鍵指標(biāo)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)束處理:6分鐘后,輕柔地移除膠帶,避免對(duì)小鼠造成傷害,并迅速將其放回原籠。隨后,徹底清理實(shí)驗(yàn)區(qū)域,收集所有排泄物,使用專(zhuān)用的清潔劑和消殺劑對(duì)實(shí)驗(yàn)設(shè)備進(jìn)行徹底清潔,確保下次實(shí)驗(yàn)的衛(wèi)生條件。
行為分析:利用VisuTrack等分析軟件,計(jì)算每只小鼠的不動(dòng)時(shí)間和掙扎行為的持續(xù)時(shí)間。通過(guò)計(jì)算平均不動(dòng)時(shí)間,并與對(duì)照組進(jìn)行比較,可以評(píng)估實(shí)驗(yàn)組小鼠是否表現(xiàn)出更多的抑郁樣行為。
統(tǒng)計(jì)處理:采用T檢驗(yàn)來(lái)分析實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間的差異,根據(jù)實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)選擇適合的配對(duì)或未配對(duì)T檢驗(yàn)。統(tǒng)計(jì)顯著性設(shè)定為P<0.05,意味著兩組之間的差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的意義。